染色体原位杂交技术服务公司-科锐诺

原位杂交第二天

1.

1）将探针回收，放于－20c保存（通常探针可重复使用十次左右）。

2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。

3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。

4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。

2.

1）用mabt洗两次，每次五分钟，染色体原位杂交技术服务公司，放在摇床轻轻摇动。

2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4c 冰箱过夜。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解---，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。