





点对点酵母双杂交验证实验流程
1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;
2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pgbkt7-bait/pgadt7-prey)、阳性对照质粒(pgbkt7-p53/pgadt7-t)、阴性对照质粒(pgbkt7-lam/pgadt7-t)分别共转到y2h gold感受态细胞中,涂布于ddo平板培养;
3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证;
4、实验数据与报告整理。

原位杂交第二天
1.
1)将探针回收,放于-20c保存(通常探针可重复使用十次左右)。
2)加入50%---胺/2xssct溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。
3)置换2xssct1ml,60℃,放置15分钟。
4)置换0.2xssct1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
2.
1)用mabt洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。
2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4c 冰箱过夜。
1,组化
实验原理:组化(ihc),是应用抗原与特---结合的原理,通过酶标与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究,染色体原位杂交经验的公司,称为组织化学技术。组化(ihc)具有特---强、敏感度高、定位准确的优点。
1, 荧光
实验原理:荧光(if),是应用抗原与特---结合的原理,通过荧光标记对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前皮诺飞生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行荧光检测。皮诺飞生物目前已突破传统的荧光双标---,开发出多色荧光技术(多可达7色)。
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