滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。
.滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。
dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。
.苏1木素复染，充分水洗。
酒精脱水，二甲1---透明，封片。
.杂交 （1） 盛有2×ssc的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2） 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3） 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4） 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%---胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。（5） 将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，酵母双杂交技术服务找，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。
染色体发现距今已有150多年的历史，染色体检测被广泛用于动、植物及人类的细胞遗传学研究，随着染色体分技术和分子生物学技术的发展。染色体研究范围也不断扩大，---是用于肿1瘤分子诊断。肿1瘤细胞的染色体变化是一非常普遍的现象，可分为原发和继发两类。在肿1瘤形成的生物学基础方面，原发性的染色体变化与引起肿1瘤的直接原因有关，肿1瘤细胞中可以发现各种形式的染色体畸变，如缺失、重复、易位、重排、单体断裂及核内复1制等；继发性变化主要是肿1瘤细胞核型的改变。染色体的检测对于肿1瘤的诊断、鉴别诊断、生物学行为判别等方面都重要意义。染色体的检测方法进展很快，检测的精1确率也不断提高，
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